【摘要】目的采用液相色譜（HPLC）法測定不同白芍藥材中芍藥苷含量，確定哪種白芍含芍藥苷zui高。方法采用色譜柱：Hypersil C18柱（4.6 mm×200 mm，5μm）；流動相：乙腈-0.05%磷酸水（14：86）；檢測：UV 230 nm；流速：1.0 ml/min；柱溫：25℃。結果2年生、10月份采收貯存期短的亳州白芍芍藥苷含量zui高。結論該方法簡便準確可靠、重復性好。

　　【關鍵詞】 白芍 芍藥苷 液相色譜 質量

　　Abstract:ObjectiveTo compare the quality of different Radix Raeoniae Alba with HPLC methods. MethodsThe separation was carried out on Hypersil C18 column（4.6 mm×200 mm，5μm）； the phase was acetonitrile-H2O （acidified to 0.05% with phosphoric acid）（14∶86）；the flow-rate was 1.0mml/min； the column temperature was 25℃. ResultsThere was the highest content of paeoniflorin in Radix Paeoniae Alba of two -year-growing time harvested in October with short storage time.ConclusionThe method is simple, rapid with good reproducibility.

　　Key words:Radix Paeoniae Alba；  Paeontflorin；  HPLC；  Quality

　　白芍為毛茛科植物芍藥Paeonia lactiflora Pall的干燥根，其主要成分為芍藥苷（Paeoniflorin）、芍藥內(nèi)脂苷（Albiflorin）、氧化芍藥苷（Oxypaeoniflorin）、苯甲酰芍藥苷（Benzoylpaeoniflorin），通稱芍藥總苷（total glucosides of paeony， TGP）。具有抗炎、抗病毒、解痙鎮(zhèn)痛、護肝等多種藥理活性。白芍藥材及各種制劑均以芍藥苷含量為質量控制標準。

　　1  儀器與試藥

　　1.1 儀器

　　液相色譜儀（四元泵、柱溫箱、MVD檢測器、Agilent1100 色譜工作站）、電子分析天平AE240 （十萬分之一，瑞士，METTLER-TOLEDO Co.）、CQ250超聲波清洗器（上海超聲波儀器廠）、UV-3300（日本日立公司）。

　　1.2  試藥

　　芍藥苷對照品（編號：0900-200102，含量測定用，中國藥品生物制品檢定所購），白芍藥材經(jīng)江西中醫(yī)學院藥用植物學科組鑒定符合2000年版《中國藥典》白芍項下標準。乙腈為色譜純（Merk Co.），水為雙蒸水，其它試劑均為分析純。

　　2  方法與結果

　　2.1  對照品溶液制備

　　精密稱取白芍對照品適量，加50%乙醇制成每毫升含60 mg的溶液，搖勻，即得。

　　2.2  供試品溶液的制備

　　精密稱取本品干燥的粉末0.5 g，置50 ml容量瓶中，精密加入50%乙醇35 ml，超聲提取30 min，冷卻，加50%乙醇至刻度，搖勻，濾過，再過0.45 μm濾膜，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

　　2.3   色譜條件

　　色譜柱： Hypersil C18柱（4.6 mm×200 mm，5 μm）（大連Elite公司）；流動相：乙腈-0.05%磷酸水（14∶86）；檢測：UV 230 nm；流速：1.0 ml/min；柱溫：25℃。理論塔板數(shù)以芍藥苷峰計算不得低于2 000。在上述色譜條件下，取對照品溶液、供試品溶液各進樣10 μl進行HPLC測定，結果見圖1～2。由圖中可見供試品中芍藥苷與芍藥苷對照品峰保留時間一致，并且與樣品中其它組分達到了很好的分離。

　　2.4  線性關系

　　考察精密稱取芍藥苷對照品0.024 80  g，置50 ml容量瓶中，加稀乙醇稀釋至刻度，即得到2.48 mg/ml的芍藥苷對照品溶液，從中分別精密吸取0.25，0.5，2.5，5.0，10.0和15.0 ml的對照品溶液，分別置6個25 ml的容量瓶中，用稀乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液。分別精密吸取上述對照品溶液各10 μl，繪制標準曲線，得回歸方程Y=1 809.398   4X+2.213 5，r=0.999 99。

　　2.5  提取方法的確定

　　本實驗對提取溶劑、提取溶劑的濃度、提取時間、提取方法等進行綜合考察，zui后確定供試品溶液的制備方法為：用50%乙醇超聲提取30 min即可。

　　2.6  精密度實驗

　　精密吸取同一份供試品溶液10 μl，重復進樣6次，測定芍藥苷基線構成之面積稱峰面積。A＝×σ×h＝2.507σh＝1.064 Wh/2h>峰面積積分值，RSD為0.80%。

　　2.7  重現(xiàn)性實驗

　　按“供試品溶液的制備”方法，對同一批樣品分別制備6份供試品溶液，各吸取10 μl進樣測定，測得芍藥苷含量RSD為0.72%。

　　2.8  穩(wěn)定性實驗

　　取同一份供試品溶液在上述色譜條件下，分別在0，6，12，24，36，72 h各進樣10 μl，測定芍藥苷峰面積積分值RSD為0.64%。

　　2.9  回收率實驗

　　采用加樣回收測定法。分別精密稱取已知含量（芍藥苷1.778%）的樣品約0.25 g，共6份，分別加入一定量的對照品（濃度為0. 88 mg/ml，精密加入5 ml），按“供試品溶液的制備”方法制備供試品溶液，進行HPLC測定，測得芍藥苷的平均回收率為99.92%，RSD為1.36%；結果見表1。結果表明，本法回收率高。表1  回收率實驗結果（略）

　　2.10  樣品含量測定

　　精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10 μl進樣測定，結果見表2。表2  13批樣品的芍藥苷含量測定結果（略）

　　3  討論

　　3.1  不同產(chǎn)地芍藥苷含量差異 從芍藥苷含量測定結果看，不同產(chǎn)地的白芍芍藥苷含量各不相同。其主要成分芍藥苷含量以亳州產(chǎn)白芍zui高；本實驗所用亳州白芍為帶皮的根，與文獻［1］報道的未去皮白芍藥材中芍藥苷含量zui高相符。

　　3.2  不同采收期芍藥苷量差異從芍藥苷含量測定結果看，以四川白芍為例，采收期8月份，9月份，10月份芍藥苷含量不同，采收期在10月份芍藥苷含量zui高，與文獻［2］報道的采收期在10月份芍藥苷含量zui高相符。

　　3.3  貯存期對芍藥苷含量的影響從白芍飲片1（貯存1年）、白芍飲片3（貯存2年）、白芍飲片4（貯存3年）芍藥苷含量測定結果看，隨貯存期的延長，白芍中芍藥苷的含量呈下降趨勢，所以白芍的貯存期不宜太長。

　　3.4  不同生長年限對芍藥苷含量的影響不同生長期亳州白芍中芍藥苷的含量不同，以2年生者含量zui高，隨著生長期的延長，芍藥苷的含量呈下降趨勢。據(jù)有關文獻報道可能因為生長期長，淀粉含量增加，芍藥苷在體內(nèi)轉化分解。這提示合理利用亳州白芍資源，可縮短生長期，增加芍藥苷含量，即經(jīng)濟又有效。

　　總之，根據(jù)上述測定結果，可見本法操作簡單，重現(xiàn)性好，可作為白芍質量控制的有效方法。

　　【參考文獻】

　　［1］施大文，董欣，何婉霞．白芍的品質評價［J］.中藥材，1988, 11（4）：39.

　　［2］陳丙鑾，杭悅宇，周義鋒，等．收獲期芍藥根中芍藥苷含量動態(tài)變化［J］.植物資源與環(huán)境學報，2002,11（2）：25.